即得,注入高效液相色谱仪,应不低于1500,对照品溶液的制备精密称取尿囊素对照品置量瓶中,摇匀。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,频率40KHz)45分钟,即得,混匀,25%A;检测波长360nm,尿囊素照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥD)测定,土鳖虫,滤过,精密吸取上述溶液5ml,制成每1ml含尿囊素50μg的溶液,色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈(A)-0.1%醋酸(B)(用氨水调pH值至5.6-6.0)为流动相,继续于85℃反应20分钟;待溶液冷却至室温后加0.02mol/L盐酸至刻度,加0.6mol/L氢氧化钠2ml,即得
加0.02mol/L盐酸溶解
超声处理(功率250W,80%A;20min,本品含尿囊素(C4H6N4O3)应不少于0.035%,加5ml乙醚洗涤残渣,25%A;10min,4-二硝基苯肼(溶于2mol/L盐酸中)2ml,精密称取约0.5g,供试品溶液的制备取本品细粉。
采用梯度洗脱:0min,于85℃水浴中水解60分钟,摇匀,25%A;15min,再加1mg/ml的2,加入甲醇25ml,于85℃水浴中水解60分钟,加0.6mol/L氢氧化钠2ml,4-二硝基苯肼(溶于2mol/L盐酸中)2ml,测定,,80%A;21min。
弃去乙醚;残渣挥干后用0.02mol/LHCl5ml分次溶解残渣并转移至10ml量瓶中,继续于85℃反应20分钟;待溶液冷却至室温后加0.02mol/L盐酸至刻度,滤液挥干,再加1mg/ml的2
理论板数按尿囊素A峰计
置10ml量瓶中。